Amaç: Cinsel işlev bozukluğu dünya çapında ciddi bir sorundur. Türkiye’de bitkisel ürünler cinsel işlev bozukluğu yaşayan bazı kişiler tarafından kullanılmaktadır. Terapötik avantajlarına rağmen, bazı bitki bileşenleri potansiyel olarak toksiktir ve sağlık riskleri oluşturur, çünkü reçetesiz olarak piyasadan satın alınabilirler. Bu nedenle, Türkiye’de tıbbi kullanım sıklıkları ve ticari önemleri esas alınarak seçilen afrodizyak etkiye sahip bitkilerin güvenliğini belirlemeyi amaçladık.
Gereç ve yöntem: On bitki (Anethum graveolens, Carthamus tinctorius, Citrus aurantium, Cocos nucifera, Glycyrrhiza glabra, Melissa officinalis, Nigella arvensis, Pinus pinea, Prunus mahaleb , ve Zingiber officinale) su, metanol ve kloroform ile ekstrakte edildi. Ekstraktların sito- ve genotoksik potansiyelleri, sırasıyla bir sıçan böbrek hücresi hattı üzerinde bir MTT testi ve Salmonella typhimurium suşlarında bir Ames testi kullanılarak değerlendirildi.
Bulgular: Sitotoksik değerlendirmede IC50 değerleri metanol ve kloroform ekstraktları için 1.51-31.4 mg/mL iken, su ekstraktları sitotoksik değildi. Genotoksik değerlendirmede, su ekstraktlarının kloroform ve metanol ekstraktlarından daha fazla mutajenik aktiviteye sahip olduğu ortaya çıkmıştır . M.’nin su ekstraktı officinalis’in TA100 (±S9) ve TA98’e (-S9) göre en fazla genotoksik aktiviteye sahip olduğu gösterilmiştir.
Sonuç: Bu sonuçlar bitkilerin toksik etkilerinin belirlenmesinde yararlı olabilir ve tüketimleri konusunda önlem alınmasına yol açabilir.
Anahtar Kelimeler: Bitkisel ürünler, otlar, sitotoksisite, genotoksisite, MTT testi, Ames testi
Antik çağlardan beri, otlar dünyanın birçok bölgesinde, büyük ölçüde balgam söktürücü, afrodizyak, idrar söktürücü, terletici, antispazmodik, mide ve yatıştırıcı özellikleri nedeniyle farklı hastalıkların tedavisinde önemli bir rol oynamıştır (1). Dünya Sağlık Örgütü, küresel nüfusun% 70-80’inin birinci basamak sağlık hizmetleri için bitkilere güvendiğini bildirmiştir. Ek olarak, doğal ürünler oldukları için, genellikle bitkilerin esasen güvenli ve yan etkilerden arındırılmış olduğuna inanılmaktadır. Sonuç olarak, reçetesiz bitkilerin tüketimi son birkaç on yılda istikrarlı bir şekilde artmıştır (2).
Otların terapötik avantajlarına rağmen, raporlar bazı bitkisel bileşenlerin potansiyel toksisitesini göstermiştir. Otlar, vücuda etki eden çeşitli kimyasal maddeler içerir. Ek olarak, bitkilerin kalitesi, uzun süreli ve yaygın kullanımdan mutajenik ve kanserojen etkilere neden olabilecek toksinler de dahil olmak üzere endüstri, tarım ve özel evlerden kaynaklanan toksik kirleticilerden etkilenebilir (3-6).
Dahası bitkisel ilaçlar genellikle tek bir preparatta bir dizi bitkinin bir karışımıdır ve çeşitli farmakolojik etkilere neden olan birkaç aktif bileşen içerir (7,8). Bugüne kadar, bitkilerin güvenliği ve etkinliği ile ilgili hem bilimsel kanıtların hem de kalite kontrol verilerinin eksikliği konusundaki endişelerin artmasına rağmen, bitkilerin güvenliği ve potansiyel toksisitesi hakkında az sayıda bilimsel çalışma bulunmaktadır (9,10).
Cinsel işlev bozukluğu dünya çapında 15-30 milyon erkeği etkileyen bir durumdur ve erkeklerin% 10-52’sinde ve kadınların% 25-63’ünde görülür (11,12). Birçoğu cinsel işlev bozukluğunun modern yaşam tarzıyla ilişkili olduğuna inanmaktadır. Sonuç olarak, bireyler cinsel gelişim için afrodizyak etkiler üreten geleneksel otlar gibi doğal ürünlere yönelirler. Afrodizyak otlar cinsel işlev bozukluğunu tedavi etmek için kullanılır, çünkü spesifik nörotransmiterleri veya cinsiyet hormonlarını değiştirirler. Spesifik olarak, afrodizyak özelliklere sahip bitkiler , sürekli bir ereksiyonla sonuçlanan vazodilatasyonu indükleyebilir ve koitus sırasında duyusal deneyimi artıran genital mukozanın tahrişine neden olabilir (13).
Reçetesiz olarak piyasada bulunan bitkilerin tüketiminin artması , diğer ülkelerde olduğu gibi Türkiye’de de kritik bir sorundur. Coğrafi konumu, iklimi ve yaklaşık 10.000 doğal bitki türünün varlığı nedeniyle, Türkiye önemli bir uluslararası floristik merkez olarak kabul edilmektedir (14,15). Ancak Türkiye’de mevcut olan bitkilerin çoğu kimyasal, toksikolojik, farmakolojik veya klinik değerlendirmelere tabi tutulmamış, ulusal sağlık otoriteleri tarafından göz ardı edilmiştir (16). Sonuç olarak, bu çalışmanın amacı, Türkiye’de afrodizyak olarak sıklıkla kullanılan on bitkinin sito- ve genotoksik potansiyellerini araştırmaktır (Tablo 1). Genotoksik aktiviteyi araştırmak için, bakteriyel bir mutasyon testi olan Ames testini yürütmek için Salmonella typhimurium TA98 ve TA100 suşları kullanıldı. Bazı durumlarda, kimyasalların kendileri mutajenik değildir, ancak karaciğerde metabolize edildikten sonra mutajenler haline gelir . Bu in vivo aktivasyon sürecini taklit etmek için, Ames testi, memeli karaciğer enzimlerinin bir karışımı olan S9 mikrozomal fraksiyon metabolize edici sisteminin hem varlığında hem de yokluğunda gerçekleştirildi. MTT testi, NRK-52E sıçan böbrek hücresi hattındaki bitkilerin sitotoksisitesini değerlendirmek için kullanıldı.
Ames mikroplaka dalgalanma (MPF™) 98/100 kiti Xenometrix’ten (Allschwil, İsviçre) satın alındı. Sigma’dan (ABD) pozitif kontroller (2-nitrofloren, 4-nitrokinolin N-oksit, 2-aminoantrasen) ve MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazolium bromür) reaktifi satın alındı. Hücre kültürü materyalleri Multicell-Wisent Inc.’den satın alındı. (Kanada). Diğer kimyasallar çeşitli kaynaklardan elde edilmiştir (Biomatik, Kanada; Merck, Almanya; Fluka, İsviçre).
Otlar (Anethum graveolens, Carthamus tinctorius, Citrus aurantium, Cocos nucifera, Glycyrrhiza glabra, Melissa officinalis, Nigella arvensis, Pinus pinea , Prunus mahaleb ve Zingiber officinale) satın alındı. Türkiye’deki yerel pazarlardan. Her bitkinin taksonomik kimliği İstanbul Üniversitesi Farmasötik Botanik Anabilim Dalı tarafından doğrulanmıştır. Otlar, mevcudiyetlerine ve geleneksel kullanım sıklıklarına göre seçildi. Bitki bileşenleri ve önceki çalışmalara dayalı kullanımları Tablo 1’de belirtilmiştir.
| Bitki | Aile | Malzemeler | Referans |
| A. graveolens | Apiaceae | Carvone, bylimonene, apiole, linoleic acid, anethole, p-anisaldehyde, myristicin, etc. | (17) |
| C. tinctorius | Asteraceae | Myristic, palmitic, stearic, arachidic, oleic, linoleic acids, etc. | (18–20) |
| C. aurantium | Rutaceae | Limonene, octanal, neodiosmin, etc. | (21) |
| C. nucifera | Arecaceae | Mineraller Vitamin Diyet Lif Şeker organik Asit yağlı asit kompozisyon Prolin Valin lösin, serin, alanin, vb. | (22–24) |
| G. glabra | Fabaceae | Glycirisin, glabranin, sitosterol, kumarin stigmasterol, fıtık, umbelliferon, vb | (25,26) |
| M. officinalis | Lamiaceae | Rutoside, kafeterik, kafeik, p-kümarik ve ferulik asitler, luteolin, apigenin, vb. | (27,28) |
| N. Sativa | Ranunculaceae | Fitosteroller, saponinler, metarbin, melantin, Lipaz α-pinen, nigellon, timokinon, timohidrokinon, timol vb. | (29,30) |
| P. pinea | Pinaceae | 1-Limonen, β-karyofilen, germacrene, abienol, Oleik Stearik abietik, isopimarik, levopimarik ve dehidroabietik asitler, vb. | (31,32) |
| P. mahaleb | Rosaceae | Fenolik asitler, o-kumarik asit, quercetin, antosiyaninler, kumarin, vb. | (33,35) |
| Z. officinale | Zingiberaceae | Oleoresin, camphen, β-phellandrene, sineol, geranial, limonen, myrcen, α-pinen, borneol, citronellol, linalool, zingiberene, vb. | (36,37) |
Yerel bitki uzmanları genellikle tüketicilere bitkileri %5-10 kaynatma olarak almalarını tavsiye eder. Her bir bitkinin farklı bileşenlerini değerlendirmek için kloroform, metanol ve su kullanılarak polar ve polar olmayan bileşikler ekstrakte edildi.
2.5 g kurutulmuş ve karıştırılmış öğütülmüş bitkileri hem 25 mL kloroform hem de metanol içinde ayrı ayrı, bir sonikasyon banyosunda (25 °C) 30 dakika boyunca çıkardık. Özler, döner bir buharlaştırıcıda konsantre edildi ve 40 °C’de hafif bir nitrojen akışı altında kurutularak katı bir tortu elde edildi. Katı tortular, 1 mL dimetil sülfoksit (DMSO) içinde çözündürüldü.
Su ile ekstraksiyon için, 2.5 g kurutulmuş ve karıştırılmış öğütülmüş otlar, 25 mL suda 30 dakika kaynatılarak ekstrakte edildi. Ekstraktlar daha sonra 0.45 um filtreler kullanılarak filtre sterilize edildi. Stok konsantrasyonları, kloroform ve metanol özütleri için 2500 mg/mL ve su özütleri için 100 mg/mL idi. Sito- ve genotoksisite deneyleri için, ekstraktlar kullanımdan önce sırasıyla 0.75-75 mg/mL ve 0.78-25 mg/mL nihai konsantrasyona seyreltildi.
Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonundan (CRL-1571) elde edilen NRK-52E sıçan böbrek hücreleriÇB, ATCC, ABD), %5 CO ve %95 O ile nemlendirilmiş hücre inkübatöründe 37 °C’de %10 ısıyla inaktive edilmiş fetal sığır serumu ve %1 streptomisin ve penisilin ile desteklenmiş Dulbecco’nun modifiye Eagle ortamında kültürlendi.
Hücreler, 10°C’de 96 oyuklu plakalara ekildi.4kuyu başına hücreler ve 24 saat boyunca inkübe edildi.İnkübasyondan sonra, her bir kuyucuğa çeşitli konsantrasyonlarda bitkisel ekstraktlar ilave edildi. Maruz kalma konsantrasyonları, test koşullarının izin verilen maksimum konsantrasyonlarına dayalı olarak 0.75-75 mg/mL olarak belirlendi. Ekstraktlarla 24 saat inkübasyondan sonra, her bir ekstraktın sitotoksisitesi, hücre hattındaki mitokondriyal aktiviteyi ölçen MTT testleri ile değerlendirildi.
Tahlil ilkesi, bir elektron-eşleştirme reaktifi varlığında sarı suda çözünür tetrazolyum tuzu MTT, 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difenil-tetrazolyum bromürün indirgenmesidir. mitokondriyal solunum zincirine ait olan ve sadece canlı hücrelerde aktif olan mitokondriyal süksinat dehidrojenaz tarafından çözünmeyen mor bir formazan ürününe dönüşür (38). Formazan ürününün optik yoğunluğu (OD), bir mikroplaka spektrofotometre sistemi (Epoch, Almanya) kullanılarak 670 nm’lik referans dalga boyuna karşı 590 nm’de okunmuştur.
Her testte negatif (işlenmemiş, kültür ortamı) ve çözücü (%1 DMSO) kontroller kullanıldı. Her ekstrakt için sekiz konsantrasyon (0.75, 1.50, 3.00, 6.00, 12.00, 25.00, 50.00 ve 75.00 mg/mL) üç kopya halinde test edildi ve her test iki kopya halinde yapıldı.
Sitotoksisite deneyleri için, %50 inhibisyon konsantrasyonu (IC), enzim aktivitesinin %50 inhibisyonuna
neden olan numunenin konsantrasyonu olarak ifade edilir. IC’yi hesaplamak için, körün absorbans değeri, her numunenin absorbans değerlerinden çıkarıldı ve sonuçlar, solvent kontrollerinin absorbans değerleri ile karşılaştırıldı.
MTT testinde IC değeri, aşağıdaki formüle göre solvent kontrollerinin yüzdesi olarak hesaplanmıştır:
İnhibisyon (%) = 100 – [(düzeltilmiş ortalama OD 100)/düzeltilmiş ortalama OD ]. 50 50 × örneklem solvent kontrolü
Geleneksel Ames testinin değiştirilmiş bir sıvı mikroplaka versiyonu olan Ames MPF™ 98/100 test kiti, genotoksisite testleri için kullanıldı. Ames tahlili için kullanılan suşlar, TA98 çerçeve kaydırma mutasyonu ve TA100 baz çifti ikame suşlarıydı.S. typhimurium. Üretici kitinden elde edilen suşlar %15 gliserol içerisinde muhafaza edildi ve kullanılıncaya kadar –80 °C’de saklandı.
Liyofilize Aroclor 1254 ile indüklenen sıçan karaciğeri S9 mikrozomal fraksiyonları da Xenometrics’ten satın alındı. Kullanımdan hemen önce S9 karışımı, metabolik aktivasyon sistemi için taze olarak hazırlanmıştır. S9 karışımı, S9
mikrozomal fraksiyonlarının %30’unu içeriyordu. S9 karışımı, 0.083 mL 1.00 M KCl, 0.080 mL 0.25 M MgCl .6HO, 0.063 mL 0.20 M glukoz-6-fosfat, 0.250 mL 0.04 M NADP, 1.270 mL 0.20 M NaH PO tamponu ve 0.750 mL S9 mikrozomal fraksiyonu(39).
Mutasyona uğramış TA98 ve TA100S. typhimurium suşlar, amino asit histidinini sentezleyemezler. Bununla birlikte, suşlar histidin üretebilir ve mutasyonun tersine dönmesi durumunda büyüyebilir. Geri dönüşleri indükleyebilen mutajenik bileşiklerin varlığı, arka plan seviyelerine göre geri dönen kolonilerin sayısında bir artışa neden olabilir. Testte, geri dönen hücrelerin katabolik aktivitesi, çözeltinin pH’ında bir azalmaya neden olur, bu da mordan sarıya bir renk değişimine neden olur (40).
Üreticinin protokolünü takiben,S. typhimurium Yarı katı formdaki TA98 ve TA100 suşları 200 μL büyüme ortamında homojenize edildi. Daha sonra, her süspansiyondan 25 uL, 10 mL büyüme ortamı ve 10 uL ampisilin (50 mg/mL) karışımına ilave edildi. Sadece bakteri suşlarından yoksun bir negatif kontrol de hazırlandı. Kültür tüpleri çalkalayıcıda 37°C ve 250 rpm’de 14-16 saat inkübe edildi.
Gecelik kültürler, büyüme ortamında (1:10) seyreltildi ve absorbans, 600 nm’de ölçüldü. Kültür ve negatif kontrollerin absorbansları sırasıyla yaklaşık 0.25 ve 0.005 ise tahlile devam edildi. Testi gerçekleştirmek için, 3 mL büyüme ortamına 1 mL gecelik kültür ilave edildi ve bir çalkalayıcıda 37 °C’de ve 250 rpm’de 90 dakika süreyle inkübe edildi. İnkübasyondan sonra kültürün absorbansı 600nm’de ölçüldü.
Ekstraktın mutajenik potansiyeli, steril ortamda %4.5’lik (h/h) nihai konsantrasyonda S9 metabolik
aktivasyon sisteminin varlığında ve yokluğunda değerlendirildi. Kullanılan pozitif kontroller, S9’suz 2-nitrofloren (2 μg/ mL) ve 4-nitrokinolin N-oksit (0.1 μg/mL) ve S9’lu 2-aminoantrasen (5 μg/mL) içeriyordu. Negatif kontrol olarak DMSO kullanıldı.
Özler, kültür ortamı içeren 24 oyuklu plakaların ayrı ayrı oyuklarına aktarıldı ve S9 karışımının varlığında veya yokluğunda 37 °C’de 90 dakika inkübe edildi. Maruz kalma konsantrasyonları, test koşullarının izin verilen maksimum konsantrasyonlarına dayalı olarak 0.78, 1.56, 3.13, 6.25, 12.50 ve 25.00 mg/mL olarak belirlendi.
90 dakika inkübasyondan sonra, 24 oyuklu plakalardaki her bir oyuğa indikatör ortamı ilave edildi. Plakanın her bir oyuğundan gelen karışım daha sonra 384 oyuklu bir mikrotitre levhasının 48 kuyusuna dağıtıldı ve 37 °C’de bir kuru inkübatörde 48 saat inkübe edildi. Gösterge ortamı, bakteri üremesinin varlığında mordan sarıya değişen bir pH gösterge boyası içeriyordu. 37 °C’de 48 saat inkübasyondan sonra plakalar, sarı kuyuların sayısı için görsel inceleme ile puanlandı.
Üç kopya halinde 48 kuyudan pozitif (sarı) kuyuların sayısı sayıldı ve negatif kontrol ile karşılaştırıldı. Ames tahlilinin sonuçlarını değerlendirmek için kullanılan kriterler, çözücü kontrol taban çizgisine göre pozitif kuyu sayısındaki kat artış ve doza bağımlılıktı. Çözücü kontrolüne göre geri dönenlerin kat artışı, her doz için ortalama pozitif oyuk sayısının çözücü kontrol taban çizgisine bölünmesiyle belirlendi.
Solvent kontrolü taban çizgisi, solvent kontrolünde pozitif kuyuların ortalama sayısı artı bir standart sapma olarak tanımlandı. Aynı koşullara (aynı gün, bakteri kültürü, çözücü ve inkübasyon koşulları) sahip bir deneyden elde edilen tüm çözücü kontrolleri birleştirildi.
Belirli bir doz için başlangıca göre 2 kat veya daha fazla artış pozitif olarak kabul edildi. Ayrıca, pozitif yanıtlar, birden fazla dozda başlangıca göre ≥2 kat olduğunda ve bir doz yanıtı gözlemlendiğinde, test numunesi pozitif olarak
sınıflandırıldı. Bir test numunesi, taban çizgisine göre hiçbir yanıt >2 kat olmadığında ve hiçbir doz yanıtı gözlemlenmediğinde negatif olarak sınıflandırıldı. Doz yanıtını değerlendirmek için Student t testi (1 taraflı, eşleştirilmemiş) kullanıldı ve P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Her deney iki kopya halinde tekrarlanmıştır.
Bu çalışmada, yaygın olarak afrodizyak olarak kullanılan on bitkiden elde edilen su, kloroform ve metanol özleri, bir
sıçan böbreğinde MTT sitotoksisite testleri kullanılarak sito- ve genotoksik potansiyelleri açısından tarandı.
Hücre hattı (NRK-52E) ve bakteriyel mutasyon deneyleri ileS. typhimuriumGenotoksisiteyi değerlendirmek için S9
metabolik aktivasyon sistemi olan veya olmayan TA98 ve TA100 suşları. Çoğu bitkinin sulu kaynatma formunda
kullanılmasına rağmen, bitkisel bileşenler organik çözücülerden etkili bir şekilde izole edildiğinden farklı
ekstraksiyon yöntemleri kullanıldı. Kullanılan konsantrasyonlar, test koşullarının izin verilen maksimum
konsantrasyonlarına göre belirlenmiştir.
MTT testinden elde edilen IC50 değerleri, metanol ve kloroform kullanılarak hazırlanan on bitki özü için 1.51 ila
51.97 mg/mL arasında değişmiştir, ancak su özütü herhangi bir sitotoksik aktivite sergilememiştir. Test edilen otlar arasında,avensismetanol ve kloroform ekstraktları için 1.51-2.44 mg/mL IC50 değerleri ile en sitotoksik olandı (Tablo 2).
Ames tahlili için 0.78, 1.56 konsantrasyonları, Metanol, kloroform ve su özütleri için 3.13, 6.25, 12.50 ve 25.00 mg/mL kullanıldı. Otların genellikle çay olarak günde birkaç kez tüketildiğini ve tek bir alım için %1-5 (h/a) oranlarının önerildiğini dikkate aldık. Analizlerimizin sonuçları bazı bitki özütlerinin mutajenik potansiyele sahip olduğunu ve su kullanılarak hazırlanan bitki özütlerinin kloroform ve metanol özütlerine göre daha yüksek mutajenik aktivite gösterdiğini göstermiştir. Ayrıca TA98 suşunun ekstraktlara TA100 türünden daha duyarlı
olduğunu ve bitkilerin mutajenik potansiyellerinin genellikle konsantrasyona bağlı olduğunu not ettik (Tablo 3).
Değerlendirilen tüm bitkilerin mutajenik aktiviteleri, Tablo 3’te pozitif veya negatif sonuç olarak belirtilmiştir.
Kloroform ekstraksiyonları için,C. nuciferave avensisözütler, S9’un yokluğunda mutajenik potansiyeller sergiledi (sırasıyla 2.5-6.5- ve 2.17-4.24-kat).
Elde edilen sonuçlar için olası bir açıklama şudur: C. nuciferaveavensisözütler, sırasıyla bir baz çifti ikamesine ve bir çerçeve kayması mutasyonuna neden olabilir. Metanol ekstraksiyonu için,A. mezarlıklarekstrakt, S9 (2.0-8.0 kat) varlığında TA98 suşu ile mutajenik potansiyel sergiledi.
Su çekimi için, A. mezarlıklar,c. tinctorius, vec. aurantiumekstraktlar, sadece TA98 suşu ile ve metabolik aktivasyon
yokluğunda mutajenik aktiviteler sergilediler (sırasıyla 2.25-4.5-, 2.14-5.82- ve 2-2.15-kat). buZ. resmi ekstraktı,
TA100 suşu (4.15-7.32 kat) ile mutajenik potansiyel gösterirken P. mahlepözü, 3.13 mg/mL’den yüksek konsantrasyonlarda S9 ile her iki suşla (2.45-9.94 kat) mutajenik potansiyel sergilemiştir.
Benzer konsantrasyonlarda,M. officinalisözüt, değerlendirilen tüm özütler arasında en yüksek düzeyde genotoksisite
sergilemiştir. Ayrıca,M. officinalisözü gösterdi. Metabolik aktivasyondan bağımsız olarak hem TA100 hem
de TA98 suşları ile mutajenik aktivite (sırasıyla 2,50-16,00 kat ve 2,5-9,5 kat).
Tablo 2. On bitkinin ekstraktlarına maruz bırakılan NRK-52E hücre hattında MTT testi ile sitotoksik aktivitenin sonuçları.
| Bitki | Extract | IC50 value (mg/mL) | Bitki | Extract | IC50 value (mg/mL) |
|---|---|---|---|---|---|
| A. graveolens | Methanol | 3.09 | M. officinalis | Methanol | – |
| Chloroform | 3.30 | Chloroform | 6.18 | ||
| Water | – | Water | – | ||
| Methanol | 5.20 | Methanol | 2.44 | ||
| C. tinctorius | Chloroform | 0.75 | N. arvensis | Chloroform | 1.51 |
| Water | – | Water | – | ||
| Methanol | 11.80 | Methanol | – | ||
| C. aurantium | Chloroform | 0.50 | P. pinea | Chloroform | 51.97 |
| Water | – | Water | – | ||
| Methanol | 18.49 | Methanol | 31.41 | ||
| C. nucifera | Chloroform | – | P. mahaleb | Chloroform | – |
| Water | – | Water | – | ||
| Methanol | – | Methanol | – | ||
| G. glabra | Chloroform | – | Z. officinale | Chloroform | 9.08 |
| Water | – | Water | – |
Tablo 3. Metabolik aktivasyonu olan/olmayan on bitkinin ekstraktlarına maruz bırakılan TA98 ve TA100 bakteri suşları kullanılarak Ames MPF™ 98/100 testi ile mutajenik aktivitenin sonuçları.
| TA98 | TA100 | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Chloroform | Methanol | Water | Chloroform | Methanol | Water | |||||||
| S9- | S9+ | S9- | S9+ | S9- | S9+ | S9- | S9+ | S9- | S9+ | S9- | S9+ | |
| A. graveolens | ?* | ?* | – | – | + | – | – | – | – | ?* | – | – |
| C. tinctorius | – | – | – | – | + | ?* | – | – | – | – | – | – |
| C. aurantium | ?* | – | – | – | + | ?* | – | – | – | – | – | – |
| C. nucifera | + | – | – | – | – | ?* | – | – | – | – | – | ?* |
| G. glabra | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | ?* |
| M. officinalis | – | – | – | – | + | – | – | – | – | – | + | + |
| N. arvensis | – | – | – | – | – | – | + | – | – | – | – | – |
| P. pinea | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – | – |
| P. mahaleb | – | ?* | – | ?* | – | + | – | – | – | – | ?* | + |
| Z. officinale | – | – | – | – | – | + | – | – | – | – | – | – |
?* = Sadece en yüksek konsantrasyonda (25 mg/mL) mutajenik aktiviteler.
+ = Çalışılan konsantrasyonlarda (0.78–25 mg/mL) mutajenik aktiviteler.
Tablo 4. Mutajenik aktiviteye sahip ekstreler için Ames MPF™ 98/100 tahlili ile elde edilen geri dönen sayılar.
| Extracts | Plants | Concentrations (mg/mL) | Revertants’ fold increase over baseline* | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| TA98 | TA100 | |||||
| S9- | S9+ | S9- | S9+ | |||
| Methanol | A. graveolens | 0.78 | 2.00 | |||
| 1.56 | 2.50 | |||||
| 3.13 | 2.00 | |||||
| 6.25 | 3.00 | |||||
| 12.50 | 8.00 | |||||
| 25.00 | 5.50 | |||||
| Chloroform | C. nucifera | 0.78 | – | |||
| 1.56 | 6.50 | |||||
| 3.13 | 3.50 | |||||
| 6.25 | 2.50 | |||||
| 12.50 | 3.60 | |||||
| 25.00 | 3.70 | |||||
| N. avensis | 0.78 | – | ||||
| 1.56 | 2.33 | |||||
| 3.13 | 2.17 | |||||
| 6.25 | 2.45 | |||||
| 12.50 | 4.24 | |||||
| 25.00 | 3.50 | |||||
| Water | A. graveolens | 0.78 | 4.50 | |||
| 1.56 | – | |||||
| 3.13 | 3.00 | |||||
| 6.25 | 2.25 | |||||
| 12.50 | 3.67 | |||||
| 25.00 | 4.12 | |||||
| C. tinctorius | 0.78 | – | ||||
| 1.56 | 2.14 | |||||
| 3.13 | – | |||||
| 6.25 | 2.73 | |||||
| 12.50 | 3.45 | |||||
| 25.00 | 5.82 | |||||
| C. aurantium | 0.78 | 2.00 | ||||
| 1.56 | 2.00 | |||||
| 3.13 | 2.50 | |||||
| 6.25 | 2.50 | |||||
| 12.50 | 2.10 | |||||
| 25.00 | 2.00 | |||||
Tablo 4. Devamı
| Extracts | Plants | Concentrations (mg/mL) | Revertants’ fold increase over baseline* | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| TA98 | TA100 | |||||
| S9- | S9+ | S9- | S9+ | |||
| M. officinalis | 0.78 | – | – | – | ||
| 1.56 | – | – | – | |||
| 3.13 | 4.00 | 3.21 | 2.56 | |||
| 6.25 | 2.50 | 2.50 | 3.21 | |||
| 12.50 | 9.00 | 11.00 | 4.30 | |||
| 25.00 | 9.50 | 9.00 | 16.00 | |||
| P. mahaleb | 0.78 | – | – | |||
| 1.56 | – | – | ||||
| 3.13 | 2.45 | 2.65 | ||||
| 6.25 | 4.14 | 2.87 | ||||
| 12.50 | 6.21 | 7.02 | ||||
| 25.00 | 9.94 | 9.35 | ||||
| Z. officinale | 0.78 | – | ||||
| 1.56 | – | |||||
| 3.13 | 6.15 | |||||
| 6.25 | 4.21 | |||||
| 12.50 | 4.15 | |||||
| 25.00 | 7.32 | |||||
| DMSO | 1.35 | 2.03 | 1.56 | 2.08 | ||
| Positive controls | 13.28 | 12.90 | 16.04 | 17.52 | ||
* Sonuçlar, Ames testinin değerlendirilmesinde belirtildiği gibi istatistiksel olarak anlamlı derecede mutajenikti (P < 0.05). Değerler araçlardır.
Bitkilerin libidoyu arttırmak, gücü ve doğurganlığı iyileştirmek ve cinsel dürtü, dayanıklılık ve enerji seviyelerini artırmak için afrodizyak olarak ve baştan çıkarma amacıyla cinsel güçlendirici olarak kullanımı tarih boyunca artmıştır (13). Doğal ürünler oldukları için şifalı otların uzun süreli kullanım için güvenli olduğu varsayılır ve hiçbir yan etkisi olmadığı düşünülür. Bu güvenlik varsayımı ve yan etkilerin olmaması potansiyel olarak tehlikeli
olabilir. Mevcut destekleyici güvenlik verilerinin olmaması ve genel nüfus tarafından bitkisel ürünlerin düzensiz kullanımı, yan etkileri ve toksisitelerini araştırmak için çalışmaları gerektirmektedir (41). Bununla birlikte, bitkisel bitkilerle ilgili kontrollü çalışmalar hala eksiktir ve tüketimleriyle ilişkili riskler bilinmemektedir. İle risk değerlendirmeleri ve önerilen bitkisel dozların oluşturulması için temel olarak sadece sınırlı sayıda in vitro, in vivo ve insan çalışmalarından elde edilen veriler mevcuttur (42).
Avrupa Gıda Güvenliği Otoritesi (EFSA), Uluslararası Yaşam Bilimleri Enstitüsü (ILSI), Tıp Enstitüsü (IOM)/Ulusal
Araştırma Konseyi (NRC), Uluslararası Temel ve Uygulamalı Kimya Birliği (IUPAC) ve Avrupa İlaç Ajansı(EMEA) yakın zamanda hem gıdalarda hem de ilaçlarda kullanılan bitkisel ürünlerin güvenlik değerlendirmesi ve toksisite testleri hakkında protokoller ve kılavuz belgeler yayınlamıştır. Düzenleyici bir bakış açısından, bir güvenlik değerlendirmesi, belirli ürünlerin kısıtlanması, piyasadan kaldırılması veya artırılmış güvenlik etiketleme bilgilerine sahip olup olmamasını etkileyebilir. Belirli bir bitkisel ürün veya içeriği hakkında çok az toksisite bilgisinin bulunduğu durumlarda, riskin azaltılmasına ilişkin düzenleyici kararlar alınması muhtemeldir. Bitkisel ürünlerin toksisitesini potansiyel olarak açıklayabilecek ve risk değerlendirmeleriyle ilgili belirsizliği azaltabilecek daha fazla bilgi elde edilene kadar dikkatli olun (42-45).
Bitkilerin bileşenleri karmaşıktır, bu da karmaşık karışımların fraksiyonlanmasını ve bileşenlerinin kimyasal
olarak tanımlanmasını zorlaştırır ve bazı durumlarda mümkün değildir. Ayrıca, bitkisel karışımların potansiyel
genotoksik ve sitotoksik etkileri, muhtemelen tek tek bileşenlerin etkilerinin toplamından farklı olabilir (8). Bu
nedenle çalışmada bitkilerin etken maddeleri analiz edilmeden bitkisel karışımların toksik profillerinin
değerlendirilmesi amaçlanmıştır.
Ames testi, karmaşık bitkisel karışımların genotoksisitesini ölçmek ve bitkisel tüketimin insan sağlığı üzerindeki genotoksik etkilerini tahmin etmek için kullanışlı bir araçtır. Ayrıca, farklı kişilerin yanıtları Salmonellatahlilde kullanılan suşlar, bitkilerde bulunan genotoksik bileşik sınıflarının belirlenmesine yardımcı olabilir (46). Bununla birlikte, pozitif bir sonuç, maddenin mutlaka kanserojen olduğunu göstermez.
Ames testi, yalnızca maddenin kullanılan belirli bakteri suşuna ve test edilen genetik son nokta için mutajenik
olup olmadığını doğrular (47). Türkiye’de tüketiciler, bu bitkilerin uygun bilimsel değerlendirmeleri ve zorunlu güvenlik ve toksikolojik araştırmalardan yoksun olmasına rağmen, piyasadan reçetesiz bitkisel ürünler satın alabilmektedir. Bu doğrultuda Türkiye’de afrodizyak olarak yaygın olarak kullanılan on bitkinin sitotoksik ve genotoksik etkilerini araştırmak amacıyla bu çalışma yapılmıştır. Böbrek, şifalı bitkilerde bulunan maddelerin çoğunun atılım yoludur.
Böbrek hasarı, çeşitli botaniklerin yutulmasıyla ilişkili olarak tanımlanmıştır (48). Bu nedenle çalışmada böbrek
hücreleri kullanıldı. Antimutajenik/antikarsinojenik potansiyellerini değerlendirmek için yürütülen az sayıda
önceki çalışmadan elde edilen veriler dışında, bu çalışmaya dahil edilen bitkiler için sınırlı genotoksisite verileri mevcuttu (49-55).
Değerlendirilen bitkilerden,M. officinalishem genotoksik hem de mutajenikti ve kanserojen potansiyele sahip olabilir (56). fenolik bileşiklerin mevcudiyeti M. officinalis, özellikle kafeik asit türevleri, belirgin genotoksisitesi ile ilişkilendirilebilir. Mutasyonların spektrumu, esas olarak guaninler ve adeninlerde baz ikameleri için büyük bir eğilim ortaya çıkardı (41). etanolik bir ekstraktM. officinalisayrıca antijenotoksik/ antimutajenik özellikler sergiledi ve ön tedavide kullanımı bir alkilleyici ajan tarafından DNA hasarının indüklenmesini azaltabilir (50).
Saraydin et al. (57) bildirdi. M. officinalis anneksin pozitif hücrelerde bir artışı ve kaspaz-7 proteininin kspresyonunu indükleyerek sitotoksik aktivite sergiledi. Aynı şekilde Saraydin et al. (57) belirtti. ile tedavi edilen sıçanlarda terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP nick end etiketleme (TUNEL) pozitif hücrelerin sayısı daha fazlaydı.M. officinalis, ise Ki-67 ekspresyonu azalmıştır. Bu çalışmada, su özütleri M. officinalisdeğerlendirilen tüm ekstraktlar arasında en yüksek düzeyde genotoksisite sergilemiştir. M. officinalismetabolik aktivasyondan bağımsız olarak TA100 suşu ile (2.50-16.00 kat) ve S9 yokluğunda TA98 suşu ile (2.5-9.5 kat) mutajenik aktiviteye sahipti. Ancak metanol ve kloroform ekstraktlarıM. officinalis mutajenik değildi.
Fukuoka ve diğerleri.(58) bildirdiA. mezarlıklar mutajenik aktivite sergilediS. typhimuriumTA98 ve TA100 suşları, Alqasoumi ve ark. (59) gözlemledi. A. mezarlıklarİsviçre albino farelerinde mikronükleus sıklığını önemli ölçüde arttırdı. Lazutka ve diğerleri.(60) özünden elde edilen uçucu yağınA. mezarlıklar kardeş kromatid değişim testlerinde ve kromozomal anormalliklerde genotoksik bulunmuştur.
İkinci rapor (60) da aynı şekilde, yayınlanmamış verilere dayanarak şunu belirtmiştir: A. mezarlıklar karşı da çok zehirliydiS. typhimuriumTA98 ve TA100 suşları. Ancak Morkunas (53) kullanarak bir mikronükleus testi yaptı.A.
mezarlıklarve bitkinin fare kemik iliğinde genotoksik olmadığını bildirdi. Fukuoka ve ark. (58) mevcut çalışmanın sonuçları göstermiştir ki,A. mezarlıklarS9 mevcudiyetinde TA98 suşu ile inkübe edilen su ekstreleri ve S9 yokluğunda TA98 suşu ile inkübe edilen metanol ekstreleri mutajenik potansiyel sergilemiştir.
Bazı çalışmalar meyan kökü (etanol özleri) olduğunu bildirmiştir.G. glabraglisirizin ve glisiretik asit içeren ), TA98 ve TA100 suşlarında negatif sonuçlar göstermiştir (61,62). genotoksik potansiyeliG. glabraAmes II kullanılarak araştırıldıÇB, kromozomal sapma ve mikronükleus test sistemleri ve sonuçlar, bitkinin metabolik aktivasyon olsun veya olmasın mutajenik aktiviteye sahip olmadığını göstermiştir (63,64). Martinez et al. (65), TA98’in meyan suyu ekstraktında bulunan mutajenlere karşı daha duyarlı olduğunu bildirmiştir.
Meyan özütü sitotoksik aktivitesinin rapor edilen yüzdesi 0.24 mg/mL’de %63’tü ve meyan konsantrasyonu 4.8 mg/
mL’ye yükseltildiğinden daha yüksek yüzdeler görüldü. Rathi et al. (66) kloroform, metanol ve su ekstraktlarının
IC50 değerlerininG. glabra Göğüs MCF7 hücre hattındaki L. sırasıyla 0.45, 0.99 ve 1.29 uM idi. Mevcut çalışmada,G. glabrasu özütü, metabolik aktivasyon varlığında, ancak yalnızca en yüksek özüt konsantrasyonunda TA100 suşuna karşı mutajenik aktivite sergiledi.
Mothana ve ark. (67), IC değerlerininc. tinctorius metanol ve su özütleri için sırasıyla 100 μg/mL ve 1000μg/mL’den büyüktü. Bununla birlikte, daha önce hiçbir çalışmada genotoksik aktivite bildirilmemiştir.c. tinctorius. Mevcut çalışmada, su özleri C. tinctoriusS9 metabolik aktivasyonunun yokluğunda TA98 suşuna karşı mutajenikti.
Bu çalışmada, değerlendirilen on bitkinin sulu kaynatmalarının hiçbiri sitotoksik aktivite sergilememiştir. Sonuçlarımıza göre Sharififar ve ark. (68) için benzer sonuçlar bildirdi. Vensisve Z. resmi Abrine karides öldürücülük testi kullanılarak. Buna karşılık, Yang ve ark. (69) bildirdiZ. resmi sitogenotoksik potansiyele sahipti.
Benzer şekilde, Wei et al. (70), diarilheptanoidlerin ve Z. officinale’den izole edilen gingerol ile ilgili bileşikler
rizom, insan promiyelositiklerine karşı sitotoksik idi. Lösemi (HL-60) hücreleri (IC50 < 50 uM), Zaeoung ve ark.
(71), Z. officinale’nin IC50’sinin aşağıdakilerden daha yüksek olduğunu bildirmiştir.
Göğüs (MCF7) ve kolona (LS174T) karşı 39,2 μg/mL hücre hatları. Rong et al. (72) uygulandığını gözlemledi
2000 mg/kg Z. officinale mutlak azalmaya neden oldu ve sıçanlarda bağıl testis ağırlıkları. Yapılan bir çalışmada
motilite, derecelendirme ve morfolojik yönleri hakkında insan spermi, Jorsaraei ve ark. (73), Z. officinale olduğunu iddia etti. Z. resmi toksik etkilere neden olmuştur. Bununla birlikte, önceki çalışmaların hiçbiri genotoksik aktivitelerini incelememiştir. Avensisve Z. resmi. Mevcut çalışmada, kloroform özleri avensisS9 metabolik aktivasyonunun yokluğunda TA100 suşu ile mutajenik aktivite sergiledi ve Z. resmiS9 varlığında TA98 suşu ile mutajenikti.
Ek olarak, kloroform özlerinin C. nuciferave su özleri c. aurantiumsu ekstraktları S9 metabolik aktivasyonunun yokluğunda TA98 suşu ile mutajenikti. P. mahlepS9 varlığında her iki suşa karşı mutajenikti. Ancak genotoksik aktiviteleri C. nucifera vec. aurantium araştırılmamıştır.
Sonuç olarak, afrodizyak olarak kullanılan bitkilerin aktif bileşenleriyle ilgili araştırmamız, bitkilerde bulunan tüm bileşikleri tanımlamanın zorluğuna rağmen, gelecekteki çalışmalar için faydalı karşılaştırmalı bilgiler sağlayabilir. Ek olarak, insan sağlığına ilişkin riskleri değerlendirmek için bu bitkilerin kanserojenliğini değerlendirmek faydalı
olacaktır. Bitkisel ürünlerin kullanımıyla ilişkili potansiyel riskleri anlamak için kalite kontrol verileri ve güvenlik ve etkinliği değerlendirmek için kullanılan yöntemlerin standardizasyonu gereklidir.
Bitkilerin doğal ürünler oldukları için güvenli olduklarına dair yaygın inancın aksine, bitkilerin önemli toksik etkilere, ilaç etkileşimlerine ve hatta morbidite veya mortaliteye neden olabileceğine dair göstergeler mevcuttur. Mevcut çalışmanın amacı,bitkisel ürünlere karşı bir önyargı getirmek değildi,
Mahmoud ABUDAYYAK1, Ebru ÖZDEMİR NATH2, Gül ÖZHAN1,*
1 İstanbul Üniversitesi Eczacılık Fakültesi, Farmasötik Toksikoloji Anabilim Dalı, İstanbul, Türkiye
2 Yeni Yüzyıl Üniversitesi, Eczacılık Fakültesi, Farmasötik Botanik Anabilim Dalı, İstanbul, Türkiye
Geliş: 29.01.2014 Kabul Edildi/ Online Yayınlandı: 13.08.2014 Basım Tarihi: 30.06.2015
Önerilen Atıf
ABUDAYYAK, MAHMUD; NATH, EBRU ÖZDEMİR; ve ÖZHAN, GÜL (2015) ” Türkiye’de afrodizyak etki için yaygın olarak kullanılan on bitkinin toksik potansiyelleri ,” Türk Tıp Bilimleri Dergisi: Cilt. 45: Hayır. 3, Madde 5. https://doi.org/10.3906/sag-1401-153
Şuradan ulaşılabilir: https://journals.tubitak.gov.tr/medical/vol45/iss3/5
Bu makale TÜBİTAK Akademik Dergileri tarafından ücretsiz ve açık erişim için sizlere sunulmaktadır. TÜBİTAK Akademik Dergilerinin yetkili editörü tarafından Türk Tıp Bilimleri Dergisi’ne eklenmek üzere kabul edilmiştir . Daha fazla bilgi için lütfen academic.publications@tubitak.gov.tr iletişime geçin.
Referanslar
1. Toker G, Memisoglu M, Yesilada E, Aslan M. Main flavonoids of Tilia argentea DESF. ex DC. leaves. Turk J
Chem 2004; 28: 745–749.
2. Maiti B, Nagori BP, Singh R, Kumar P, Upadhyay N. Recent trends in herbal drugs: a review. Int J Drug Res Tech 2011;1: 17–25.
3. Akinboro A, Bakare AA. Cytotoxic and genotoxic effects of aqueous extracts of five medicinal plants on Allium cepa Linn. J Ethnopharmacol 2007; 112: 470–475.
4. Chan K. Some aspects of toxic contaminants in herbal medicines. Chemosphere 2003; 52: 1361–1371.
5. Ernst E. Risks of herbal medicinal products. Pharmacoepidemiol Drug Safety 2004, 13: 767–771.
6. Rietjens IMCM, Boersma MG, Van der Woude H, Jeurissen SMF, Schutte ME, Alink GM. Flavonoids and
alkenylbenzenes: mechanisms of mutagenic action and carcinogenic risk. Mutation 2005; 574: 124–138.
7. Haugen DA, Peak MJ. Mixtures of polycyclic aromatic compounds inhibit mutagenesis in the Salmonella/microsome assay by inhibition of metabolic activation. Mutation Res 1983; 116: 257–269.
8. Hermann M. Synergistic effects of individual polycyclic aromatic hydrocarbons on the mutagenicity of their
mixtures. Mutation Res 1981; 90: 399–409.
9. Firenzuoli F, Gori L. Herbal medicine today: clinical and research issues. Evid Based Complement Alternat Med 2007, 4: 37–40.
10. Rousseaux CG, Schachter H. Regulatory issues concerning the safety efficacy and quality of herbal remedies. Birth Defects Res B Dev Reprod Toxicol 2003; 68: 505–510.
11. Patel DK, Kumar R, Prasad SK, Hemalatha S. Pharmacologically screened aphrodisiac plant – a review of
current scientific literature. Asian Pac J Trop Biomed 2011; 131–138.
12. Shah J. Erectile dysfunction through the ages. Br J Urol Int 2002; 90: 433–441.
13. Jain N, Goyal S, Ramawat KG. Biotechnological approaches to aphrodisiac plants of Rajasthan, India. Desert Plants 2010; 479–495.
14. Cakilcioglu U, Turkoglu I. An ethnobotanical survey of medicinal plants in Sivrice (Elazığ-Turkey). J Ethnopharmacol 2010; 132: 165–175.
15. Kültür Ş. Medicinal plants used in Kırklareli Province (Turkey). J Ethnopharmacol 2007; 111: 341–364.
16. Toksoy D, Bayramoglu M, Hacisalihoglu S. Usage and the economic potential of the medicinal plants in Eastern Black Sea Region of Turkey. J Environ Biol 2010; 31: 623–628.
17. Huopalathi R, Lahtinen R, Hiltunen R, Laakso I. Studies on the essential oils of dill herb, Anethum graveolens L. Flavour Frag J 1988; 3. 121–125.
18. Ichihara KI, Noda M. Fatty acid composition and lipid synthesis in developing safflower seeds. Phytochemistry 1980; 19: 49–54.
19. Suleimanov TA. 2004. Phenolic compounds from Carthamus tinctorius. Chem Natural Compounds 40: 13–
15.
20. Zhou YZ, Chen H, Qiao L, Xu N, Cao JQ, Pei YH. Two new compounds from Carthamus tinctorius. J Asian Nat Prod Res 2008; 10: 429–433.
21. Pultrini AM, Galindo LA, Costa M. Effects of the essential oil from Citrus aurantium L. in experimental anxiety models in mice. Life Sci 2006; 78: 1720–1725.
22. Magnaval C, Noirot M, Verdeil JL, Blattes A, Huet C, Grosdemange F, Buffard-Morel J. Free amino acid
composition of coconut (Cocos nucifera L.) calli under somatic embryogenesis induction conditions. J Plant
Physiol 1995; 146: 155–161.
23. Rodrigues S, Pinto GAS. Ultrasound extraction of phenolic compounds from coconut (Cocos nucifera) shell powder. J Food Eng 2007; 80: 869–872.
24. Santoso U, Kubo K, Ota T, Tadokoro T, Maekawa A. Nutrient composition of kopyor coconuts (Cocos nucifera
L.). Food Chem 1996; 57: 299–304.
25. Mendes-Silva W, Assafim M, Ruta B, Monteiro RQ, Guimar JA, Zingali RB. Antithrombotic effect of glycyrrhizin, a plant-derived thrombin inhibitor. Thrombosis Res 2003; 112: 93–98.
26. World Health Organization. WHO Monographs on Selected Medicinal Plants. Vol. 1. Geneva, Switzerland:
WHO; 1999.
27. Hanganu D, Vlase L, Filip L, Sand C, Mirel S, Indrei LL. The study of some polyphenolic compounds from Melissa officinalis L. (Lamiaceae). Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi 2008; 112: 525–529.
28. Patora J, Majda T, Gora J, Klimek B. Variability in the content and composition of essential oil from lemon balm (Melissa officinalis L.) cultivated in Poland. Acta Pol Pharm 2003; 60: 395–400.
29. Ramadan MF. Nutritional value, functional properties and nutraceutical applications of black cumin (Nigella sativa L.). Int J Food Sci Technol 2007; 42: 1208–1218.
30. Ghosheh OA, Houdi AA, Crooks PA. High performance liquid chromatography analysis of the pharmacologically active quinines and related compounds in the oil of the black seed (Nigella sativa). J Pharmac Biomed Anal 1999;19: 757–762.
31. Nergiz C, Dönmez I. Chemical composition and nutritive value of Pinus pinea L. seeds. Food Chem 2004; 86: 365–368.
32. Simón BF, Vallejo MCG, Cadahía E, Miguel CA, Martinez MC. Analysis of lipophilic compounds in needles of Pinus pinea L. Ann For Sci 2001; 58: 449–454.
33. Alma MH, Karaoğul E, Ertaş M, Altuntaş E. Chemical composition of seed oil from Turkish Prunus mahaleb L. In: Fakir H, Dutkuner İ, Gürlevik N, Sarıkaya O, Babalık AA, editors. 2nd International Non-Wood Products
Symposium Proceedings. Isparta, Turkey: Süleyman Demirel University; 2011. pp. 64–67.
34. Jerković I, Marijanović Z, Staver MM. Screening of natural organic volatiles from Prunus mahaleb L. honey: coumarin and vomifoliol as nonspecific biomarkers. Molecules 2011; 16: 2507–2518.
35. Leri F, Pinelli P, Romani A. Simultaneous determination of anthocyanins, coumarins and phenolic acids in fruits, kernels and liqueur of Prunus mahaleb L. Food Chem 2012, 135: 2157–2162.
36. Baytop T. Geçmişten günümüze bitkilerle tedavi. 2nd ed. İstanbul, Turkey: Nobel Tıp Kitabevi; 1999 (in Turkish).
37. European Scientific Cooperative on Phytotherapy. ESCOP Monographs. 2nd ed. New York, NY, USA: Thieme; 2003.
38. Alley MC, Scudiero DA, Monks A, Hursey ML, Czerwinski MJ, Fine DL, Abbott BJ, Mayo JG, Shoemaker RH, Boyd MR. Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay. Cancer Res 1988; 48: 589–601.
39. Hakura A, Shimada H, Nakajima M, Sui H, Kitamoto S, Suzuki S, Satoh T. Salmonella/human S9 mutagenicity test: a collaborative study with 58 compounds. Mutagenesis 2005; 20: 217–228.
40. Umbuzeiro GDA, Rech CM, Correia S, Bergamasco AM, Cardenette GHL, Flückiger S, Kamber M. Comparison of the Salmonella/microsome microsuspension assay with the new microplate fluctuation (MPF) protocol for testing the mutagenicity of environmental samples. Environ Mol Mutagen 2010; 51: 31–38.
41. Alves AM, Vidal LS, Kuster RM, Lage C, Leitão AC. Genotoxic and mutagenic effects of Melissa officinalis (ervacidreira) extracts. Open Toxicol J 2009; 3: 58–69.
42. Bast A, Chandler RF, Choy PC, Delmulle LM, Gruenwald J, Halkes SBA, Keller K, Koeman JH, Peters P, Przyrembel H et al., Botanical health products, positioning and requirements for effective and safe use. Environ Toxicol Pharmacol 2002; 12: 195–211.
43. EMEA Ad Hoc Working Group on Herbal Medicinal Products. Report from the Ad Hoc Working Group on
Herbal Medicinal Products 1977/1998. London, UK: The European Agency for the Evaluation of Medical Products;1999.
44. Jordan SA, Cunningham DG, Marles RJ. Assessment of herbal medicinal products: challenges, and opportunities to increase the knowledge base for safety assessment. Toxicol Appl Pharmacol 2010; 243: 198–216.
45. Wu KM, Dou J, Ghantous H, Chen S, Bigger A, Birnkrant D. Current regulatory perspectives on genotoxicity testing for botanical drug product development in the U.S.A. Regul Toxicol Pharmacol 2010; 56: 1–3.
46. Maron DM, Ames BN. Revised methods for the Salmonella mutagenicity test. Mutation Res 1983; 113: 173–215.
47. Zeiger E. Mutagens that are not carcinogenic: faulty theory or faulty tests? Mutation Res 2001; 492: 29–38.
48. Jha V. Herbal medicines and chronic kidney disease. Nephrology 2010; 15: 10–17.
49. Abdullah S, Abidin S, Murad N, Makpol S, Ngah W, Yusof Y. Ginger extract (Zingiber officinale) triggers apoptosis and G0/G1 cells arrest in HCT 116 and HT 29 colon cancer cell lines. Afr J Biochem Res 2010; 4: 134–142.
50. De Carvalho NC, Corrêa-Angeloni MJ, Leffa DD, Moreira J, Nicolau V, Amaral PA, Rossatto AE, de Andrade VM. Evaluation of the genotoxic and antigenotoxic potential of Melissa officinalis in mice. Genet Mol Biol 2011; 34: 290–297.
51. Kaur P, Kumar M, Singh B, Kumar S, Kaur S. Amelioration of oxidative stress induced by oxidative mutagens and COX-2 inhibitory activity of umbelliferone isolated from Glycyrrhiza glabra L. Asian Pac J Trop Biomed 2012; 2:120–126.
52. Kruawan K, Kangsadalampai K. Antioxidant activity, phenolic compound contents and antimutagenic activity
of some water extract of herbs. Thai J Pharm Sci 2006; 30: 28–35.
53. Morkunas V. Investigation on the genetic toxicology of dill essential oil and benzo(a)pyrene in mouse bone marrow by micronucleus test. Bioloija 2002; 4: 14–16.
54. Plengsuriyakarn T, Viyanant V, Eursitthichai V, Tesana S, Chaijaroenkul W, Itharat A, Na-Bangchang K. Cytotoxicity, toxicity, and anticancer activity of Zingiber officinale Roscoe against cholangiocarcinoma. Asian Pac J Cancer Prev 2012;13: 4597–606.
55. Rao BN, Rao BS. Antagonistic effects of zingerone, a phenolic alkanone against radiation-induced cytotoxicity, genotoxicity, apoptosis and oxidative stress in Chinese hamster lung fibroblast cells growing in vitro. Mutagenesis 2010; 25: 577–587.
56. De Sousa AC, Alviano DS, Blank AF, Alves PB, Alviano CS, Gattass CR. Melissa officinalis L. essential oil: antitumoral and antioxidant activities. J Pharm Pharmacol 2004; 56:677–681.
57. Saraydin SU, Tuncer E, Tepe B, Karadayi S, Özer H, Şen M, Karadayi K, Inan D, Elagöz Ş, Polat Z et al. Antitumoral effects of Melissa officinalis on breast cancer in vitro and in vivo. Asian Pac J Cancer Prev 2012; 13: 2765–2770.
58. Fukuoka M, Yoshihira K, Natori S, Sakamoto K, Iwahara S, Hosaka S, Hirono I. Characterization of mutagenic principles and carcinogenicity of dill weed and seeds. J Pharmacobiodyn 1980; 3: 236–244.
59. Alqasoumi S, Khan T, Al-Yahya M, Al-Mofleh I, Rafatullah S. Effect of acute and chronic treatment of common spices in Swiss albino mice: a safety assessment study. Int J Pharmacol 2012; 8: 80–90.
60. Lazutka JR, Mierauskiene J, Slapsyte G, Dedonyte V. Genotoxicity of dill (Anethum graveolens L.), peppermint (Menthax piperita L.) and pine (Pinus sylvestris L.) essential oils in human lymphocytes and Drosophila melanogaster. Food Chem Toxicol 2001; 39: 485–492.
61. Mitscher LA, Drake S, Gollapudi SR, Harris JA, Shankel DM. Isolation and identification of higher plant agents active in antimutagenic assay systems: Glycyrrhiza glabra. Basic Life Sci 1986; 39: 153–165.
62. Zani F, Cuzzoni MT, Daglia M, Benvenuti S, Vampa G, Mazza P. Inhibition of mutagenicity in Salmonella
typhimurium by Glycyrrhiza glabra extract, glycyrrhizinic acid, 18a- and 18b-glycyrrhetinic acids. Planta Medica
1993; 59: 502–507.
63. Chandrasekaran CV, Sundarajan K, Gupta A, Srikanth HS, Edwin J, Agarwal A. Evaluation of the genotoxic potential of standardized extract of Glycyrrhiza glabra (GutGard™). Regul Toxicol Pharmacol 2011; 61: 373–380.
64. Nakagawa K, Hidaka T, Kitano M, Asakura M, Kamigaito T, Noguchi T, Hosoe K. Genotoxicity studies on licorice flavonoid oil (LFO). Food Chem Toxicol 2008; 46: 2525– 2532.
65. Martinez A, Ikken Y, Cambero MI, Marin ML, Haza AI, Casas C, Morales P. Mutagenicity and cytotoxicity
of fruits and vegetables evaluated by the Ames test and 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
bromide (MTT) assay. Food Sci Technol Int 1999; 5: 431–437.
66. Rathi SG, Suthar M, Patel P, Bhaskar VH, Rajgor NB. In-vitro cytotoxic screening of Glycyrrhiza glabra L.
(Fabaceae): a natural anticancer drug. Pharmacol 2009; 1: 239–243.
67. Mothana RA, Abdo SA, Hasson S, Althawab FM, Alaghbari SA, Lindequist U. Antimicrobial, antioxidant and cytotoxic activities and phytochemical screening of some Yemeni medicinal plants. Evid Based Complement Alternat Med 2008; 7: 323–330.
68. Sharififar F, Moshafi MH, Dehghan-Nudehe G, Ameri A, Alishahi F, Pourhemati A. Bioassay screening of the
essential oil and various extracts from 4 spices medicinal plants. Pak J Pharm Sci 2009; 22: 317–322.
69. Yang G, Zhong L, Jiang L, Geng C, Cao J, Sun X, Ma Y. Genotoxic effect of 6-gingerol on human hepatoma G2
cells. Chem Biol Interac 2010; 185: 12–17.
70. Wei QY, Ma JP, Cai YJ, Yang L, Liu ZL. Cytotoxic and apoptotic activities of diarylheptanoids and gingerolrelated compounds from the rhizome of Chinese ginger. J Ethnopharmacol 2005; 14: 177–184.
71. Zaeoung S, Plubrukarn A, Keawpradub N. Cytotoxic and free radical scavenging activities of Zingiberaceous
rhizomes. Songklanakarin J Sci Technol 2005; 27: 799–812.
72. Rong X, Peng G, Suzuki T, Yang Q, Yamahara J, Li Y. A 35- day gavage safety assessment of ginger in rats. Regul Toxicol Pharmacol 2009; 54: 118–123.
73. Jorsaraei SG, Yousefnia YR, Zainalzadeh M, Moghadamnia AA, Beiky AA, Damavandi MR. The effects of methanolic extracts of ginger (Zingiber officinale) on human sperm parameters; an in vitro study. Pak J Biol Sci 2008: 11: 1723–1727.
Tıbbi ve Aromatik Bitkiler 
markasıdır.